李振乾(450052,郑州大学第一附属医院病理科河南省肿瘤病理重点实验室);李道明(450052,郑州大学第一附属医院病理科河南省肿瘤病理重点实验室);李江伟(450052,郑州大学第一附属医院病理科河南省肿瘤病理重点实验室);黄培(450052,郑州大学第一附属医院病理科河南省肿瘤病理重点实验室);秦慧(450052,郑州大学第一附属医院病理科河南省肿瘤病理重点实验室);
摘要
目的:探讨沉默CD147基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖、运动能力的影响。方法构建CD147小干扰RNA( siRNA)慢病毒载体并转染各实验组MDA-MB-231细胞,采用免疫细胞化学ABC法检测沉默前后MDA-MB-231细胞中CD147、基质金属蛋白酶( MMP)-2、金属蛋白酶类组织抑制剂( TIMP)-2蛋白的表达水平;采用即时定量PCR 和Western Blot 技术检测CD147、MMP-2、TIMP-2的mRNA和蛋白表达水平改变;采用CCK-8法和划痕实验分别检测细胞的增殖和迁移能力;建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察CD147 siRNA对裸鼠瘤体质量和体积的影响。结果转染MDA-MB-231细胞后,CD147、MMP-2、TIMP-2蛋白呈弱阳性或阴性表达,明显低于对照组( P<0.01)。转染72 h时,CD147基因下调平均效率为96.03%±0.84%,MMP-2基因下调平均效率48.64%±0.35%,mRNA表达均明显下降(P<0.05),而TIMP-2 mRNA表达水平与对照组相比差异无统计学意义( P>0.05)。转染第2天后, MDA-MB-231细胞生长明显受到抑制( P <0.05)。转染24 h 后MDA-MB-231细胞平均迁移距离为(0.64±0.12) mm,而空白对照组细胞平均迁移距离为(4.69±0.85)mm,迁移速度减小。沉默CD147基因后,裸鼠瘤体体积和瘤体质量均下降(P<0.05),平均瘤体质量为(1.85±0.98)g,移植瘤的生长受到抑制(P<0.05)。结论 CD147可以影响MDA-MB-231细胞中的MMP-2/TIMP-2平衡,沉默CD147基因可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖和迁移及裸鼠移植瘤的生长。
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