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缺氧反应元件启动子表达反义血管内皮生长因子(VEGF)165 cDNA靶向性抑制骨肉瘤细胞VEGF表达

王燕(昆明医学院第二附属医院病理科);汪睿(解放军第五三三医院);乔慧(510089,广州,中山大学中山医学院病理学教研室);李晋云(昆明医学院附属第二医院病理科);彭挺生(510089,广州,中山大学中山医学院病理学教研室);李扬(510089,广州,中山大学中山医学院病理学教研室);张萌(510089,广州,中山大学中山医学院病理学教研室);梁惠珍(510089,广州,中山大学中山医学院病理学教研室);丘钜世(510089,广州,中山大学中山医学院病理学教研室);
阅读：337 中华病理学杂志； 2005年34卷9

摘要

目的以缺氧诱导因子-1/缺氧反应元件(HIF-1/HRE)基因调节系统为载体,构建含HRE启动子的人反义血管内皮生长因子(VEGF)165 cDNA真核表达载体,探讨其对缺氧条件下骨肉瘤细胞VEGF表达的靶向性抑制作用.方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技术构建由HRE启动子驱动的含荧光素酶(Luc)报告基因和人反义VEGF165 cDNA全长的真核表达质粒,将其转染骨肉瘤细胞系MG63,用液闪计数仪测定缺氧对报告基因表达的调节,酶链免疫吸附试验(ELISA)法检测缺氧条件下细胞VEGF表达的变化.结果成功构建了由HRE启动子驱动的含Luc和反义VEGF165 cDNA全长的真核表达质粒pBI-HRE-Luc-AsVEGF165,该质粒转染骨肉瘤细胞系,缺氧条件下可使报告基因在肿瘤细胞中的表达提高3.5×102倍,使肿瘤细胞VEGF分泌下降45%.结论利用肿瘤缺氧,HRE启动子能够实现反义VEGF165的高效表达,为开展靶向性抗肿瘤血管生成治疗提供了实验依据.

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