冷冻时间对脑组织切片质量的影响
摘要
脑组织由于其组织成分的特殊性,冷冻制片的质量困扰着许多技术人员.作者对比了48例术中冷冻脑组织的不同冷冻时间的制片质量,以寻求脑组织冷冻制片最佳的冷冻时间. 1 材料与方法 1.1 材料 选自广东省人民医院神经外科手术切除的脑组织标本48例,每例标本分5个冷冻时间进行实验.送检标本不经任何试剂处理,避免接触自来水,用纱布吸净组织表面液体. 1.2 方法 采用Shondon冷冻切片机;包埋剂:OCT包埋剂由德国Leica生产.切片前先将恒冷切片机的箱体温度设定为-25℃,样品头温度设定为-14C.待新鲜的脑组织取材完后,先将冻头置入冷冻机.待冻头稍冷却,滴适量OCT包埋剂.出现一层白色冻结后,再平放脑组织.冷却时间分别为1.5、2.5、3.5、4.5和5.5 min,常规各切取6μm厚切片,黏附于洁净载玻片上,立即置入纯甲醇中固定1 min.切片水洗,Lili-mayer苏木精染色1 min,水洗,1％碳酸锂返蓝30 s,伊红染色10 s,梯度乙醇脱水,封片.整个冷冻切片过程需要8～ 10 min.
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