肝细胞癌中与转录激活因子3相互结合的蛋白质的筛选及验证

李小燕(福建医科大学附属协和医院病理科);臧盛兵(福建医科大学基础医学院病理学系肿瘤研究室,福州,350001);方雪婷(福建医科大学基础医学院病理学系肿瘤研究室,福州,350001);马小杰(福建医科大学基础医学院病理学系肿瘤研究室,福州,350001);黄爱民(福建医科大学基础医学院病理学系肿瘤研究室,福州,350001);

阅读：369 中华病理学杂志； 2016年45卷05期

摘要

目的筛选及验证肝癌细胞中与转录激活因子3(ATF3)相互结合的蛋白质,初步探讨在肝癌发生发展中协助ATF3发挥生物学功能的相关分子机制.方法应用免疫沉淀法沉淀出HepG2细胞中与ATF3相互结合的蛋白,经变性聚丙烯凝胶分析,与空载体组比对,挑选出差异性的电泳条带进行蛋白质谱分析,筛选出候选蛋白;再经免疫共沉淀验证二者是否相互结合;应用免疫组织化学及Western blot检测并分析ATF3和候选蛋白在肝癌中的表达模式.结果过表达ATF3的HepG2实验组呈现出差异性表达的电泳条带;经质谱检测,Mascot软件分析及NCBI数据库检索,得到候选蛋白肽段信息,结合前期实验结果,PubMed文献报道,从中筛选出与ATF3最可能相关的蛋白gelsolin(GSN);免疫共沉淀结果验证了ATF3与GSN相互结合的关系,免疫组织化学及Western blot检测出肝癌组织中ATF3与GSN的表达模式一致.结论 ATF3可能通过与GSN蛋白之间的相互作用,在肝癌形成过程中协同发挥抑癌作用.

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