喉癌组织中LCRG1基因启动子的克隆、突变和甲基化检测

李金花(杭州师范大学附属医院病理科,杭州310015南华大学肿瘤研究所,衡阳421000);曾龙武(南华大学肿瘤研究所,衡阳,421000);谢海龙(南华大学肿瘤研究所,衡阳,421000);

阅读：293 临床与实验病理学杂志； 2013年29卷8

摘要

目的观察喉癌候选抑瘤基因(laryngeal carcinoma related gene 1,LCRG1)启动子的功能.方法 (1)通过5′-缺失突变、瞬时转染与荧光素酶报告基因活性检测,进一步分析与LCRG1基因表达调控有关的最小启动子区域;(2)通过PCR-单链构象多态性(PCR-single-strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)技术检测40例喉癌组织中LCRG1基因启动子突变;(3)应用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测40例喉癌组织中LCRG1基因启动子甲基化状态;(4)采用RT-PCR技术检测40例喉癌组织中LCRG1基因的表达.结果(1)LCRG1基因最小启动子片段位于转录起始位点上游-169~-57位点;(2)喉癌组织中LCRG1基因启动子无突变;(3)40例喉癌组织中有5.00% LCRG1基因启动子甲基化改变;(4)RT-PCR检测显示40%(16/40)喉癌组织中LCRG1基因表达下调.结论 LCRG1基因最小启动子位于转录起始位点上游-169~-57位点的DNA片段;LCRG1基因启动子甲基化部分改变可能参与该基因的表达调控.

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