一种鉴定重组子的快速简便方法

何文芳(暨南大学医学院病理解剖学教研室);孙晗笑(暨南大学医学院病理解剖学教研室);谢作煊(暨南大学医学院病理解剖学教研室);

阅读：599 临床与实验病理学杂志； 2001年17卷4

摘要

篇首：外源DNA与质粒DNA连接产生大量待鉴定的重组子.目前一般采用常规碱裂解法或煮沸法小量提取质粒DNA后,酶切鉴定[1,2].或者用菌落PCR法鉴定重组子[3].酶切鉴定要求质粒DNA质量较高,且要求量较大,菌落PCR由于菌量较少,常会出现丢失菌落情况.对于质粒DNA小量制备,目前常采用常规的碱裂解法和煮沸法,前者操作步骤多,较繁锁,后者在加热裂解时可释放相对大量的糖类,很难避免质粒DNA内污染有糖类,而糖类可抑制多种限制酶的活性.另外煮沸不能完全灭活内切核酸酶A,在Mg2+存在下温育时质粒DNA会被降解. 我们在实际工作中采用快速裂解法提取大肠杆菌(DH52)的重组子,并采用PCR扩增法进行鉴定,有效避免了以上问题,获得满意的效果. 1 细菌培养电泳,电泳后在紫外灯下观察到的电泳带一致(图1).

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