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下调Smoothened基因抑制乳腺癌干细胞生长的相关机制

毛俊(116044,大连医科大学中日临床病理中心);范盼红(116044,大连医科大学中日临床病理中心);马威(116044,大连医科大学中日临床病理中心);张晴晴(116044,大连医科大学中日临床病理中心);王波(116044,大连医科大学中日临床病理中心);范姝君(116044,大连医科大学中日临床病理中心);李连宏(116044,大连医科大学中日临床病理中心);
阅读：668 中华病理学杂志； 2013年42卷4

摘要

目的 利用短发夹RNA(shRNA)下调Smoothened(SMO)基因的表达,研究SMO对乳腺癌干细胞增殖的影响.方法 设计针对人SMO基因的shRNA,转染人乳腺癌MCF-7细胞系,G418筛选出稳定下调SMO基因的细胞株.体外:活细胞计数试剂盒(CCK8)检测细胞增殖的变化,流式细胞仪检测CD44+/CD24-乳腺癌干细胞比例,悬浮球培养检测乳腺球形成的能力,Western blot检测SMO、GLI1及Oct4的表达.体内:每3天检测各组裸鼠成瘤情况,免疫组织化学SP法检测SMO的表达,Western blot检测SMO、GLI1及Oct4蛋白的表达.结果 21 d后筛选出稳定下调SMO基因的MCF-7细胞.CCK8结果显示下调SMO基因可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖.流式细胞仪显示下调SMO基因后,CD44 +/CD24-细胞和乳腺癌干细胞球形成的比例明显降低.下调后裸鼠的肿瘤生长速度下降.免疫组织化学检测显示阴性对照组中SMO阳性表达比例为5/5,SMO-shRNA组阳性比例为2/5.两组肿瘤组织中SMO的蛋白表达水平分别为0.72 ±0.17和0.21±0.09,GLI1的蛋白表达水平分别为1.21±0.21和0.47 ±0.12,Oct4的蛋白表达水平分别为0.83 ±0.13和0.25±0.07.SMO、GLI-1和Oct4在SMO-shRNA组中的表达明显低于阴性对照组(P＜0.05).结论 下调SMO基因可以抑制乳腺癌干细胞的增殖.

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