抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体基因的真核载体构建和表达

常德(北京协和医学院基础学院病理学系,中国医学科学院基础医学研究所,100005);张建华(北京协和医学院基础学院病理学系,中国医学科学院基础医学研究所,100005);赵雪梅(北京协和医学院基础学院病理学系,中国医学科学院基础医学研究所,100005);梁平(北京协和医学院基础学院病理学系,中国医学科学院基础医学研究所,100005);

阅读：326 中华病理学杂志； 2010年39卷8

摘要

目的通过基因工程抗体技术构建和表达抗β-淀粉样多肽(Aβ)人-鼠嵌合抗体,减低鼠源单克隆抗体在临床应用中引起的人体免疫排斥反应.方法从分泌抗Aβ1-42鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增鼠源性抗体全长基因,并通过Blast对其序列进行分析;利用重组PCR技术拼接重轻链可变区及人IgG1的恒定区基因,并对重链Fc段进行定点突变以降低排斥反应;分别构建人-鼠嵌合基因重轻链表达载体,用脂质体法将其同时导入COS-7细胞中表达,并利用ELISA和免疫组织化学(SP法)对分泌的抗体功能和性质进行初步鉴定.结果 Blast比对分析结果显示克隆的基因序列符合小鼠抗体基因序列,将可变区基因与人IgG1的恒定区基因拼接以及Fc定点突变后,成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达;ELISA和免疫组织化学方法证实了所分泌抗体的人源性和与Aβ的结合特异性.结论成功地构建和表达了抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体,为其在阿尔茨海默病的临床诊治中应用和进一步改造奠定了基础.

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抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体基因的真核载体构建和表达

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