肝细胞癌患者血清蛋白质组成分的双向凝胶电泳-飞行时间质谱分析
摘要
目的分析肝细胞癌患者与正常人血清双向凝胶电泳的差异蛋白质,寻找肝癌早期血清学诊断的可能指标.方法固相pH梯度双向凝胶电泳分离肝细胞癌患者及正常人血清总蛋白.银染显色,PDQuest 2DE软件分析,对差异蛋白质点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱, 用PepIdent软件查询SWISS-PROT数据库.结果获得了重复性较好的双向电泳银染图谱.图像分析检测3块胶平均匹配的点数占平均蛋白点数的匹配率是70.2%.等电聚焦方向的平均偏差为(1.02±0.22) mm,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向的平均偏差为(0.97±0.14) mm.将23个差异点进行胶内原位酶解-质谱指纹图分析,获得15张肽质指纹图,查询数据库进行了初步鉴定.结论固相pH梯度双向凝胶电泳分离人血清总蛋白获得重复性较好的结果,但仍需进一步探索如何去除高丰度已知蛋白及脂类等物质的方法,以便得到分辨率更高的双向电泳银染图谱.MALDI-TOF-MS肽质指纹图分析鉴定的结果为人肝细胞癌血清学诊断指标的筛选提供了依据.
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