目的 探讨乳腺癌中Ki-67免疫组化检测过程中主要影响因素对其染色结果的影响.方法 收集60例癌灶直径≥2.5cm的乳腺癌新鲜手术标本,制作组织芯片,采用免疫组化两步法染色和图像分析,比较不同影响因素下乳腺癌Ki-67阳性细胞百分数的变化.结果 不同冷缺血时间(0.5、1、3和6h)分组的Ki-67增殖指数差异无统计学意义(x2=5.536,P=0.136).不同固定时间分组(3、12、24、48和96 h)Ki-67增殖指数均值分别为20.58％、26.84％、28.93％、29.91％和27.91％,差异有统计学意义(x2=13.837,P =0.008).抗原修复法分组中,微波pH 6.0的柠檬酸缓冲液组、微波pH 9.0的EDTA缓冲液组、高压pH 6.0的柠檬酸缓冲液组和高压pH 9.0的EDTA缓冲液组Ki-67增殖指数均值分别为22.66％、28.93％、26.72％和32.62％,差异有统计学意义(x2=17.967,P=0.000).一抗克隆号分组中,MIB1、SP6、7B11和EP54组Ki-67增殖指数均值分别为28.93％、32.88％、24.98％和20.47％,差异有统计学意义(x2=15.755,P=0.001).二抗显色系统EnVision、PV8000和MaxVision组的Ki-67增殖指数差异无统计学意义(x2=0.332,P=0.847).结论 乳腺癌中Ki-67免疫组化染色结果对于6h以内标本冷缺血时间和较长的固定时间有较强耐受性,但固定时间低至3h、不同的抗原修复法和抗体克隆号选择对检测结果有较大影响,二抗显色系统选择对检测结果无明显影响.