目的 探讨儿童神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)ALK蛋白表达与ALK基因遗传学及表观遗传学改变的相关性,并分析NB的ALK蛋白表达异常及ALK基因异常的临床病理学意义.方法 培养三个NB细胞株,其中两株为ALK阳性表达(SH-SY5Y和SK-N-SH),一株为ALK阴性表达(SK-N-AS),并收集43例NB石蜡包埋组织标本及相应临床资料;运用免疫组织化学EnVision法检测NB细胞株及石蜡包埋组织标本的ALK蛋白表达;运用荧光原位杂交(FISH)检测ALK基因的拷贝数;运用PCR技术、Sanger测序技术检测ALK基因点突变;运用重亚硫酸盐测序技术(BSP)检测ALK基因启动子区CpG岛的甲基化状态.结果 SH-SY5Y和SK-N-SH细胞株的ALK蛋白表达于胞质,而SK-N-AS无ALK蛋白表达;43例神经母细胞瘤组织中,ALK蛋白阳性者26例(60.5％,26/43),阴性者17例(39.5％,17/43),ALK蛋白表达与患者的生存期相关,ALK蛋白阳性表达者,生存期较短(P =0.020),但ALK蛋白表达与NB的分化状态(P=0.503)、发病部位(P=1.000)及年龄(P =0.063)无相关性.43例NB中,ALK基因扩增者2例(4.6％,2/43),ALK基因获得者30例(69.7％,30/43),余者ALK基因正常(25.6％,11/43),ALK基因多拷贝(包括扩增和获得)与ALK蛋白阳性表达有明显相关性(P =0.020),ALK基因多拷贝倾向ALK蛋白的阳性表达;ALK基因多拷贝与NB的分化状态(P=1.000)、发病部位(P =0.775)及年龄(P =0.328)无相关性.三个NB细胞株中均未发现ALK基因的点突变,43例NB组织中,仅发现1例(2.3％,1/43)存在ALK基因的点突变[第23号外显子同义突变A1200A(G4552C)],其ALK蛋白呈阴性表达,在诊断后2个月死亡;BSP检测显示,三株细胞ALK基因启动子区CpG岛均未甲基化,6例NB患者(其中3例ALK阳性,3例ALK阴性)ALK基因启动子区CpG岛也均未甲基化.结论 大部分NB组织中ALK蛋白表达阳性,ALK蛋白阳性表达者提示不良预后.ALK蛋白阳性表达与ALK基因多拷贝相关,但与ALK基因启动子区甲基化无明显相关性.ALK基因多拷贝是NB中比较常见的遗传学改变.ALK基因点突变率很低,有可能提示不良预后.