反义hTERT基因对白血病细胞端粒酶表达及活性的抑制作用

孙来保(518026,深圳市儿童医院病理科);李成荣(518026,深圳市儿童医院病理科);文剑明(中山大学中山医学院病理教研室);王国兵(518026,深圳市儿童医院病理科);张萌(中山大学中山医学院病理教研室);杨军(518026,深圳市儿童医院病理科);李若馨(518026,深圳市儿童医院病理科);

阅读：277 中华病理学杂志； 2004年33卷5

摘要

目的探讨反义hTERT基因体外对白血病细胞端粒酶基因表达及其活性的抑制作用. 方法采用基因重组技术设计并构建了针对端粒酶活性蛋白催化亚单位mRNA的5′端序列的反义pcDNA-hTERT真核表达载体,通过SuperFect(QIAGEN)将其瞬时转染人早幼粒白血病细胞株HL60及人红白血病细胞株K562,并运用流式细胞术测定其细胞凋亡与细胞周期的变化,同时运用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应方法对其端粒酶蛋白催化亚单位基因的表达水平进行了检测,端粒酶活性的检测则采用了非放射性TRAP-银染法.结果成功地构建了反义pcDNA-hTERT真核表达载体,并将其转染至K562和HL60白血病细胞株.结果与空载体组、空白组相比,反义pcDNA-hTERT组体外显示出明显有效地抑制端粒酶的基因表达及其活性的作用;在细胞凋亡与细胞周期方面,反义组能引起细胞周期左移,增殖分裂能力降低,同时伴有细胞凋亡数的增加.结论研究构建的反义hTERT基因体外确实能明显有效地下调白血病细胞端粒酶的基因表达及其活性,在抗肿瘤基因治疗中具有特异的靶向性和潜在应用的广谱性.

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