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人端粒酶hTERT抗体制备、鉴定及在肿瘤检测中的应用

杨邵敏(100083,北京大学医学部病理学系);张波(100083,北京大学医学部病理学系);王俊梅(100083,北京大学医学部病理学系);廖松林(100083,北京大学医学部病理学系);韩继生(100083,北京大学医学部病理学系);卫建平(太原山西医科大学第二附属医院病理科);侯琳(100083,北京大学医学部病理学系);
阅读：376 中华病理学杂志； 2002年31卷1

摘要

目的人端粒酶蛋白亚基(hTERT)单克隆抗体制备及肿瘤检测应用.方法利用多肽固相合成法(Fmoc法)合成hTERT抗原多肽,免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤法制备单克隆抗体.应用ELISA,Western blot和免疫组织化学ABC法进行鉴定和肿瘤检测.结果经合成得到hTERT抗原多肽hTERT9,免疫小鼠及细胞融合后得到抗hTERT9杂交瘤细胞;经3次有限稀释法及ELISA筛选获得抗hTERT9单克隆抗体的杂交瘤细胞H4、G8和A11;H4、G8为IgM类,而A11为IgG1.半抗原竞争性抑制实验证明为hTERT9特异性单克隆抗体;相对亲和力实验发现G8株亲和力较H4株和A11株强.用H4及G8 株单克隆抗体检测HeLa、293细胞,免疫印迹有特异相对分子质量≈123 000 hTERT条带,免疫组织化学显示为细胞核着色,而正常细胞2BS无阳性反应.免疫组织化学方法检测人癌组织、癌前病变、良性病变hTERT表达发现:人肿瘤组织细胞阳性率为80.31%(102/127),且大多为中度阳性和强阳性;癌前病变中,hTERT有17.5%(7/40)弱阳性;良性肿瘤均为阴性.统计学分析表明:hTERT在癌组织的表达显著高于癌前及良性病变(P<0.01).结论通过固相合成hTERT抗原多肽和杂交瘤技术成功制备抗人端粒酶蛋白亚基hTERT单克隆抗体,并能运用于免疫印迹、免疫组织化学对癌细胞及组织的hTERT表达检测.

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