siRNA沉默p75神经营养因子受体逆转胶质瘤恶性表型
摘要
目的 利用小干扰RNA(siRNA)技术沉默与胶质瘤细胞凋亡和侵袭密切相关的p75神经营养因子受体(p75NTR)基因,观察其逆转胶质瘤恶性表型的治疗效果.方法 设计靶向p75NTR基因的siRNA片段,脂质体转染人U251胶质瘤细胞系,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法 检测p75NTR的mRNA和蛋白表达;Transwell细胞侵袭实验检测U251细胞的侵袭力;软琼脂集落形成实验检测细胞集落形成能力;建立裸鼠颅内U251胶质瘤荷瘤模型,原位重复注射siRNA-p75NTR/脂质体复合物3次,MRI检测颅内瘤体积,免疫细胞化学SP法检测p75NTR、神经生长因子(NGF)和细胞周期蛋白(cyclin)D2表达,用TUNEL法做移植瘤细胞原位细胞凋亡检测.结果 转染siRNA基因片段的U251细胞p75NTR mRNA和蛋白质表达水平显著下降(P<0.05),细胞侵袭能力及软琼脂集落形成能力均显著降低(P<0.05);体内实验显示p75NTR的表达程度与NGF的表达呈正相关,与cyclin D2表达及原位细胞凋亡数量呈负相关,MRI示瘤体积增长缓慢,边界轮廓清晰,动物生存期明显延长(P<0.05).结论 靶向p75NTR的siRNA技术可有效降低胶质瘤细胞的侵袭及增殖能力,诱导肿瘤细胞凋亡.
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