慢病毒介导的shRNA靶向干扰NSD2三阴乳腺癌稳定细胞株的建立
摘要
目的:构建针对核受体结合SET结构域蛋白2(nuclear receptor binding SET domain protein 2,NSD2)的短发夹干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)慢病毒干扰载体,建立稳定干扰NSD2基因的MDA-MB-231三阴乳腺癌细胞株.方法:构建2条针对人源NSD2基因的shRNA(shNSD2-1#和shNSD2-2#),连接到慢病毒载体(pGLV10/U6/RFP/Puro)并进行测序鉴定.将NSD2 shRNA慢病毒载体与包装质粒共转染到293T细胞,慢病毒包装后进行滴度检测.将包装好的慢病毒转染至三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞中,嘌呤霉素筛选建立稳定转染NSD2 shRNA的细胞株.采用real-time PCR检测NSD2 mRNA的表达变化,蛋白质印迹法检测NSD2及其特异性催化的组蛋白甲基化标志物H3K36me2蛋白水平的表达变化.结果:成功构建两个NSD2 shRNA慢病毒干扰载体;与阴性对照组相比,shNSD2-1#组和shNSD2-2#组MDA-MB-231细胞中NSD2 mRNA和蛋白水平均显著下调,NSD2催化的H3K36me2蛋白表达也随之下调.结论:本研究成功建立了shRNA慢病毒载体介导的稳定敲低NSD2的MDA-MB-231细胞株,证实干扰NSD2基因表达能有效抑制其对组蛋白H3K36的甲基化作用,为进一步研究NSD2在乳腺癌中的作用机制奠定了基础.
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