外泌体介导miR-106a转运对胃癌细胞腹膜种植转移的影响
摘要
目的 探讨肿瘤源性外泌体(tumor-derived exosomes,TDEs)介导miR-106a转运对胃癌细胞腹膜种植的影响及可能机制.方法 选择人低分化胃癌细胞系AGS进行培养,从细胞培养上清液中提取外泌体,透射电镜及蛋白质印迹法对外泌体进行鉴定;采用Real-time PCR检测外泌体与细胞内miR-106a的表达差异;将外泌体标记荧光染料PKH26与人腹膜间皮细胞HMrSV5共培养,采用激光共聚焦显微镜观察外泌体的吞噬;增设阴性对照组,划痕实验检测外泌体介导下miR-106a转运对间皮细胞迁移能力的影响,Real-time PCR和Western blot检测miR-106a靶基因Smad7及间质标志物α-SMA的表达.结果 透射电镜显示AGS细胞培养上清液中所提取的微囊泡直径30 ～150 nm,Western blot显示外泌体标记蛋白CD9、CD81均为阳性.Real-time PCR结果显示外泌体miR-106a表达量显著高于细胞内(P＜0.05).携带PKH26红色荧光信号的外泌体可被间皮细胞摄取.划痕实验结果显示外泌体处理组间皮细胞迁移能力明显增强(P＜0.001),Real-time PCR和Western blot检测结果显示靶基因Smad7表达下调,α-SMA表达上调(P＜0.001).结论 胃癌细胞来源的外泌体可促进腹膜间皮细胞迁移,参与转移前微环境形成,其机制可能与外泌体介导miR-106a转运,转录后抑制Smad7表达并诱导间质转化相关.
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