YAP对卵巢癌干细胞增殖的影响
摘要
目的:探讨YAP基因在卵巢癌干细胞中的表达和作用.方法:取对数期人卵巢细胞株OVCAR-3,胰酶消化后制备单细胞悬液,利用流式细胞术鉴定卵巢癌干细胞.将YAP 5个磷酸化位点突变(YAP-5SA)及C末端缺失(YAP-△C)载体构建在慢病毒载体上,并且将YAP-5SA,YAP-△C载体的病毒转染卵巢癌干细胞,筛选稳定转染的细胞进行MTT细胞增殖实验、平板克隆实验.取卵巢癌干细胞,YAP-5SA和YAP-△C稳定转染的卵巢癌干细胞,接种在15只裸鼠中,观察4周,每周记录1次瘤体体积.结果:分离制备的细胞接种在DMEM培养基中培养24 h后细胞数量开始增多,生长5d时不同细胞长满瓶底,细胞成干细胞球形,流式细胞仪测定该细胞CD44阳性率为99.8％,CD117为0.76％.YAP在卵巢癌干细胞高表达且YAP-5SA促进卵巢癌干细胞增殖和平板细胞克隆形成,YAP-△C抑制卵巢癌干细胞增殖和平板细胞克隆形成.YAP-△C稳转卵巢癌干细胞促进瘤体生长,YAP-△C抑制卵巢癌干细胞瘤体生长.结论:YAP-5SA促进卵巢干细胞增殖,参与卵巢癌的发生、发展.
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