Cas9稳定表达人肿瘤细胞株的建立及其基因编辑活性

卞晓翠(100005中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系100005中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院细胞资源中心);杨振丽(100005中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系100005中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院细胞资源中心);冯海凉(100005中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院病理学系100005中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院细胞资源中心);赵晓梅(100005,中国医学科学院基础医

阅读：1615 中华病理学杂志； 2017年46卷01期

摘要

目的：建立多种Cas9蛋白稳定表达的人肿瘤细胞株，验证细胞中Cas9的基因编辑活性，方便后续研究中目的基因的编辑。方法在15种来自不同组织的人肿瘤细胞株中通过慢病毒感染pLv-EF1α-Cas9-Flag-Neo或pLv-EF1α-Cas9-Flag-Puro及克隆筛选的方式建立Cas9稳定表达的细胞株；在其中3个细胞株中瞬时转入靶向TSC22基因的向导RNA，挑选单克隆，通过基因组PCR、测序及Western blot检测Cas9蛋白的基因编辑活性。结果筛选得到了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株，瞬时转入向导RNA后成功造成了细胞中TSC22基因的大片段缺失。结论成功建立了69株Cas9稳定表达的人肿瘤细胞株，其中的Cas9蛋白具有基因编辑活性。这些细胞株在大规模药物筛选、新药作用靶点的筛选以及基因功能研究等方面有潜在应用价值。

全文链接

Cas9稳定表达人肿瘤细胞株的建立及其基因编辑活性

摘要

摘要

我要评论

共0条评论

本期排行