小鼠Wnt-1基因真核表达载体构建及其在大鼠成肌细胞中的表达

王秋艳(河北省秦皇岛港口医院心内科CCU,河北,秦皇岛,066000);杜文娟(哈尔滨医科大学附属第二临床医院心内科,哈尔滨,150086);李继科(哈尔滨医科大学附属第二临床医院心外科,哈尔滨,150086);杨艳波(哈尔滨市第二医院心内科,哈尔滨,150056);于波(哈尔滨医科大学附属第二临床医院心内科,哈尔滨,150086);

阅读：360 临床与病理杂志； 2009年29卷3

摘要

目的:构建p-EGFP-C3-Wnt-1真核表达载体并转染体外培养大鼠成肌细胞,观察Wnt-1在其中的表达.方法:利用RT-PCR方法从小鼠胚脑中扩增获得Wnt-1基因编码区全长序列,克隆到含有增强型绿色荧光蛋白报告基因的真核表达载体p-EGFP-C3上,形成重组载体p-EGFP-C3-Wnt-1.大鼠成肌细胞原代培养及desmin免疫荧光染色鉴定.利用Lipofectamine TM2000脂质体将重组质粒p-EGFP-C3-Wnt-1转染成肌细胞.结果:重组质粒p-EGFP-C3-Wnt-1构建成功;将其转染成肌细胞72 h后,观察到EGFP报告基因和目的基因Wnt-1表达.结论:成功构建了小鼠胚脑Wnt-1基因的真核表达载体p-EGFP-C3-Wnt-1,并可转染成肌细胞.

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