目的回顾性分析非小细胞肺癌(NSCLC)中采用直接测序法检测的表皮生长因子受体(EGFR)基因突变率、突变分布特征及其与临床病理的相关性。方法收集NSCLC共443例，其中包括手术切除样本299例、粗针穿刺活检标本59例、细针穿刺和胸腔积液细胞学样本85例。所有样本均通过石蜡包埋、切片后确定肿瘤细胞含量，显微切割富集肿瘤细胞后采用聚合酶链反应-直接测序法检测EGFR基因酪氨酸激酶编码区第18至21号外显子的突变。结果(1)在443例NSCLC标本中共检出EGFR基因突变193个，发生在189例患者中(42.7％)；EGFR基因第18至21号外显子的突变率分别为2.0％( 4/193)、48.7％ (94/193)、6.7％ (13/193)和42.5％ (82/193)；(2)EGFR基因总突变率与年龄无显著相关性，但在年龄大于中位年龄（57岁）的患者中第21号外显子的突变率(50.9％，54/106)高于年龄小于或等于中位年龄者(32.2％，28/87；P＜0.01)；(3)女性患者中EGFR基因突变率(53.5％,107/200)高于男性患者突变率(33.7％，82/243；P ＜0.01)；(4)腺癌中的突变率(46.5％，161/346)高于鳞癌(13.3％，4/30；P＜0.01)和低分化癌者(24.1％，7/29；P＜0.05)，而与腺鳞癌(7/13)差异无统计学意义(P＞0.05)；(5)在手术切除、粗针穿刺活检以及细针穿刺和胸腔积液细胞学样本中EGFR突变检出率有逐渐下降的趋势，分别为49.5％( 148/299)、35.6％ (21/59)和23.5％ (20/85)，其中细针穿刺和胸腔积液的细胞学样本中的检出率较手术标本中的检出率为低(P＜0.01)。结论直接测序法是检测NSCLC中EGFR基因突变的有效方法，特别对未知突变类型的检出具有优势；NSCLC中EGFR基因突变在女性和腺癌中多见，以第19号外显子的缺失突变和第21号外显子的点突变为主；EGFR基因突变分布特征可能与年龄有一定关系；EGFR基因突变检出率与样本类型密切相关，活检组织及细胞学样本是检测EGFR基因突变的有用材料，但可能会漏检部分患者中EGFR基因的突变。