起始识别复合物1基因在血管平滑肌细胞DNA复制中的作用
摘要
目的 探讨起始识别复合物1(ORC1)在血管平滑肌细胞(VSMC)DNA复制中的表达及其意义.方法 采用组织块贴片法原代培养的大鼠胸主动脉VSMC,利用双胸苷阻断、秋水仙素阻抑法和血清饥饿法使VSMC达到细胞周期同步化,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和Western blot检测不同细胞周期的VSMC ORC1 mRNA和蛋白表达.结果 同步化的VSMC DNA含量百分比,血清饥饿法以G0G1期为主(P＜0.01),双胸苷阻断14 h以G0G1期为主(P＜0.01),双胸苷阻断14 h后10%胎牛血清刺激6 h以S期为主(P＜0.01),秋水仙素培养12 h以G2/M期为主(P＜0.05).静止状态VSMC的ORC1 mRNA和蛋白质无表达,处于G1/S期VSMC的ORC1 mRNA表达量显著高于S期和G2/M期.VSMC的ORC1蛋白质表达量与ORC1 mRNA变化规律相似.结论 ORC1随细胞的分裂周期而表达,ORC1可能是启动VSMC DNA复制的关键因子.
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