夏慧玲(210009,南京,东南大学附属中大医院肾脏病研究所);刘必成(210009,南京,东南大学附属中大医院肾脏病研究所);张晓良(210009,南京,东南大学附属中大医院肾脏病研究所);刘殿阁(210009,南京,东南大学附属中大医院肾脏病研究所);吴冀宁(210009,南京,东南大学附属中大医院肾脏病研究所);张建东(210009,南京,东南大学附属中大医院肾脏病研究所);弓玉祥(210009,南京,东南大学附属中大医院肾脏病研究所);
摘要
目的 观察整合素连接激酶(ILK)在单侧输尿管梗阻小鼠(UUO)肾脏中的表达,并探讨其在肾小管上皮细胞转化中的作用.方法 将10周龄健康雄性CD-1小鼠随机分为假手术组(C,n=20)和UUO组(n=40),分别于术后1、3、7、14 d处死小鼠.采用Masson染色观察肾间质纤维化程度;用免疫组织化学(SP法)的方法 观察ILK、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western blot半定量分析梗阻侧肾组织ILK的蛋白水平;用即时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测ILK、E-cadherin和α-SMA mRNA的表达.结果 免疫组织化学显示ILK在假手术组只有微量表达,主要位于肾小球脏层上皮细胞,UUO术后1 d ILK蛋白表达显著增多(t=16.5,P<0.01),7 d达高峰.术后3 d肾小管上皮细胞及肾间质α-SMA阳性细胞数显著增多(t=21.0,P<0.01),肾小管上皮细胞表达E-cadherin明显减少(t=5.6,P<0.01).根据免疫组织化学结果 分析,术后1~7 d,ILK蛋白表达与α-SMA蛋白表达呈正相关(R=0.88,<0.01),与E-cadherin表达呈负相关(R=-0.87,P<0.01).Western blot结果 显示ILK蛋白表达于术后1 d明显增加,7 d达高峰,14 d表达不再增加(P>0.05).RT-PCR结果 显示术后l d ILK mRNA表达增多(t=141.6,P<0.01),E-cadherin mRNA表达于术后3 d显著减少(P<0.01),α-SMA mRNA表达于术后3 d开始增多(P<0.01).结论 UUO模型早期整合素连接激酶表达增高,可能通过介导肾小管上皮细胞-间充质转化而参与肾脏纤维化的发生发展.
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