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使用RNAi技术抑制HeLa细胞p42MAPK表达

黄辰(710061,西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室);刘利英(710061,西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室);宋土生(710061,西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室);倪磊(710061,西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室);宋丽萍(西安交通大学医学院附属第一医院);胡劲松(710061,西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室);赵小鸽(710061,西安交通大学医学院环境与疾病相关基因教育部重点实验室);司履
阅读：361 中华病理学杂志； 2006年35卷5

摘要

目的筛选可抑制HeLa细胞p42MAPK表达的siRNA.方法采用体外转录合成的方法,合成针对p42MAPK的siRNA 3条和阴性对照siRNA 1条,并进行Cy-3荧光标记,用脂质体转染HeLa细胞,以判断转染效果.应用噻唑蓝(MTF)法和流式细胞仪检测siRNA的作用效果,筛选具有功能的siRNA序列;应用Western blot方法鉴定siRNA抑制p42MAPK表达的效果.结果从3条p42MAPKsiRNA中筛选出2条有效的序列siRNA-2和siRNA-3,与空白对照组、脂质体对照组和随机siRNA-4相比,两者均可诱导HeLa细胞p42MAPK表达下调,Western blot结果分析显示,与随机siRNA-4相比分别下调了1/2和2/3,并抑制HeLa细胞的增殖(P＜0.05),同时改变了细胞周期各时相的细胞分布.结论p42MAPK siRNA-2和siRNA-3在体外实验中可沉默目的基因以及抑制HeLa细胞增殖.

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