O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶siRNA联合替莫唑胺对黑素瘤细胞增殖的影响
摘要
目的:研究O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-methylguananine-DNA methyltransferase,MGMT)对人黑素瘤细胞耐替莫唑胺(temozolomide,TMZ)的影响及机制.方法:体外培养人黑素瘤A375细胞、M14细胞、MV3细胞,采用RT-qPCR及蛋白质印迹法检测细胞MGMT的表达量;CCK-8法检测细胞的增殖抑制率;蛋白质印迹法检测不同干扰序列对黑素瘤细胞MGMT的干扰效果;蛋白质印迹法检测细胞内PARP,DNA-PKcs和NF-κB蛋白表达.结果:RT-PCR及蛋白质印迹法结果显示不同黑素瘤细胞MGMT表达量不同,其中A375细胞MGMT表达量最高,MV3细胞的表达量最少;蛋白质印迹法结果显示转染MGMT siRNA后黑素瘤细胞MGMT表达量明显下降(P<0.05);CCK-8结果显示TMZ对A375细胞及M14细胞的生长增殖有抑制作用,并且这种作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05);蛋白质印迹法结果可见MGMT siRNA联合TMZ处理组PARP,DNA-PKcs,NF-κB蛋白表达减弱(P<0.05).结论:MGMT siRNA联合TMZ显著抑制黑素瘤A375和M14细胞增殖.
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