缺氧诱导因子-2α与MMP-2启动子结合位点的确定
摘要
目的 探讨缺氧诱导因子-2α (hypoxia inducible factor-2α, HIF-2α)与基质金属蛋白酶-2 (matrixmetallo proteinases-2, MMP-2)基因中缺氧反应元件(hypoxia-response element, HRE)的体外结合,并确定该结合位点.方法 采用凝胶滞留电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)鉴定HIF-2α与MMP-2基因中HRE的体外结合;同时利用染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)进一步验证并确定该结合位点.结果 成功预测2条MMP-2启动子区潜在的HIF-2α结合位点,分别为-217 ～-204、-1 029～-1 007;探针标记效率检测结果显示,正义链和反义链标记效率均为50％以上,可用于EMSA实验;结果显示,MMP-2启动子区存在HIF-2α的结合位点,位于-217 ～-204.CHIP结果显示,实验组和对照组均扩增出约bp MMP-2启动子中含HRE区域的片段,提示HIF-2α蛋白与MMP-2启动子中的HRE区域存在活体内结合的关系.结论 HIF-2α与MMP-2基因中的HRE存在体内外结合.
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