AdMax系统构建腺病毒载体介导SCL基因转染Cajal样间质细胞及其表达

周建民(甘肃省张掖市人民医院泌尿外科,张掖,734000);王勤章(石河子大学医学院附属第一医院泌尿外科,石河子,832000);丁国富(石河子大学医学院附属第一医院泌尿外科,石河子,832000);屠松(甘肃省张掖市人民医院泌尿外科,张掖,734000);牛世杰(甘肃省张掖市人民医院泌尿外科,张掖,734000);杨发英(甘肃省张掖市人民医院泌尿外科,张掖,734000);

阅读：472 临床与实验病理学杂志； 2012年28卷1

摘要

目的构建含有人干细胞白血病(stem cell leukemia,SCL)基因的重组腺病毒载体,并观察其对豚鼠膀胱Cajal样间质细胞的转染及其介导SCL基因的表达.方法采用PCR方法从含人SCL基因质粒中扩增SCL基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-EGFP/SCL,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pDC315-SCL经HEK293细胞扩增,纯化后测定病毒滴度.通过观察绿色荧光蛋白的表达评估重组腺病毒对Cajal样间质细胞的转染率,RT-PCR法分析转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA的表达.结果 PCR结果和Western blot法检测证实pDC315-SCL重组腺病毒载体构建成功,滴度达到1×1010 PFU/ml,对膀胱Cajal样间质细胞的转染率高达98%,RT-PCR法检测转染Cajal样间质细胞后SCL mRNA有表达.结论成功构建pDC315-SCL重组腺病毒载体对Cajal样间质细胞有很强的转染能力,可介导SCL基因在Cajal样间质细胞的表达.

全文链接

AdMax系统构建腺病毒载体介导SCL基因转染Cajal样间质细胞及其表达

摘要

摘要

我要评论

共0条评论

本期排行