肺癌石蜡包埋组织及新鲜标本组织芯片制备方法学探讨
摘要
目的:探讨和建立石蜡包埋组织和新鲜冷冻标本制备组织芯片的方法,以及在基因表达分析中的应用.方法:选取肺癌石蜡包埋组织90例,新鲜液氮冻存肺癌及癌旁肺组织20例,常规切片HE染色下确定穿刺部位,石蜡包埋组织芯片制作按Kononem等方法(1998),每例穿取0.6 mm组织柱2条,制备180点阵组织芯片;而新鲜组织芯片参考Fejzo 等方法(2001),并略作改良,制备50点阵组织芯片.所有组织芯片模块,经4 μm切片、常规组织学染色和免疫组化染色,以评价其在形态学及基因表达分析中应用的可行性.结果:180点阵石蜡包埋肺癌组织芯片,组织排列整齐,HE染色后组织形态可观察率在98%以上;p53、c-myc、bcl-2、bax和Ki-67等免疫组化染色后,肺癌组织可见不同程度的抗原表达,组织点阵的形态可观测率在89%～95%之间.新鲜组织芯片经HE染色后,形态可观测率和基因表达可分析率在70%左右.结论:手工法组织芯片制备简便易行,使用组织少,不破坏原蜡块;实验均一性、可比性好,且节省试剂.与常规组织切片相比,2点0.6 mm组织可以获得原蜡块95%以上的信息,完全可以用于组织形态学和蛋白水平上的基因表达分析;新鲜组织芯片技术已经初步建立,但尚有待于进一步完善制备技术和mRNA 分析方法.
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