bax过表达对乙醇诱导的肝癌细胞凋亡的促进作用
摘要
目的 探讨促凋亡基因bax过表达对乙醇诱导的原发性肝细胞癌(简称肝癌)细胞凋亡的调节作用.方法 用脂质体介导的基因转染法将含有人bax cDNA的噬菌粒表达载体pBK-bax质粒导入人肝癌细胞系HCC-9204细胞中,同时设转染pBK-CMV空载体的和未转染的HCC-9204细胞对照.通过用G-418筛选后获得转入目的 基因的细胞克隆.用免疫细胞化学ABC法、图像定量分析和Westert blot法检测bax蛋白在转染bax或空载体前后细胞中的表达情况.用6%乙醇分别作用于上述细胞6 h后,MTT法检测细胞杀伤率,TUNEL染色法和流式细胞仪DNA含量分析法检测细胞凋亡的发生程度.结果 转染后用G-418持续筛选2周,获得了导入bax或空载体的G-418抗性的细胞克隆.转染bax基因的细胞对bax蛋白的表达强度明显强于转染空载体或未转染的细胞,而转染空载体与未转染细胞的bax蛋白表达强度无明显差异.经低浓度乙醇作用后,转染bax的肝癌细胞的细胞杀伤率、TUNEL指数和亚二倍体凋亡峰比例均明显高于转染空载体或未转染的细胞.结论 bax蛋白过表达能够促进低浓度乙醇诱导的肝癌HCC-9204细胞凋亡.
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