稳定过表达饰胶蛋白聚糖基因对大鼠肾系膜细胞凋亡的影响

吴慧娟(复旦大学分子医学教育部重点实验室,复旦大学上海医学院病理学系,200032);刘媛(复旦大学分子医学教育部重点实验室,复旦大学上海医学院病理学系,200032);薛爱民(复旦大学分子医学教育部重点实验室,复旦大学上海医学院法医学系,200032);刘晔(复旦大学分子医学教育部重点实验室,复旦大学上海医学院病理学系,200032);王素霞(复旦大学分子医学教育部重点实验室,复旦大学上海医学院病理学系,200032);陈琦(复旦大学分子医学教育部重点实验室,复旦大学上海医学院病理学系,200032);

阅读：352 中华病理学杂志； 2008年37卷3

摘要

目的观察稳定过表达饰胶蛋白聚糖(DCN)基因对大鼠肾系膜细胞(MsC)凋亡的影响.方法采用脂质体介导法将pcDNA3.1A-DCN质粒稳定转染MsC,G418筛选阳性克隆.细胞免疫荧光法、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法鉴定并获得转染DCN阳性的细胞株(MsC/DCN);脂质体介导法将DCN-siRNA瞬时转染MsC/DCN以干扰DCN表达,Western印迹法鉴定.Hoechst染色和流式细胞仪观察细胞凋亡及比率,Western印迹法检测活性凋亡相关激酶半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白的表达.结果成功建立了过表达DCN基因的细胞株MsC/DCN.MsC/DCN中凋亡率为(20.40±8.01)%,显著高于MsC的凋亡率(2.07±0.99)%(P＜0.01),部分MsC/DCN发生典型的形态学改变.活性Caspase-3的蛋白表达也明显高于MsC(P＜0.01).DCN-siRNA瞬时转染不仅有效干扰了MsC/DCN中DCN的表达和降低了细胞凋亡率,而且显著下调了活性Caspase-3的蛋白表达.结论大鼠MsC中DCN基因的过表达能诱导MsC发生凋亡,为肾小球疾病中调控MsC增生提供了新的实验依据.

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