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myocardin基因沉默在PDGF-BB诱导小鼠骨髓间充质干细胞向平滑肌样细胞分化中的作用

黄冠(华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所,武汉,430030);许梅(华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所,武汉,430030);余俊(华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所,武汉,430030);孟寒(华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所,武汉,430030);陈雪(华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所,武汉,430030);李燕(华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所,武汉,430030);阮秋蓉(华中科技大学同济医学院附属同济医院病理研究所,武汉,430
阅读：324 中华病理学杂志； 2009年38卷2

摘要

目的 构建myocardin特异性siRNA真核表达载体,体外观察其对myocardin基因的沉默效应及对小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向平滑肌样细胞分化过程中的影响.方法 培养小鼠骨髓问充质干细胞并利用血小板源生长因子(PDGF-BB,50 mg/L)联合高浓度胎牛血清(20%FBS)诱导其向平滑肌样细胞分化;构建含U6启动子和myocardin特异短发卡RNA(shRNA)编码序列的质粒载体pGen-myo-shRNA,以含非特异性shRNA编码序列的质粒载体pGenesil-Con(pCon)为阴性对照,分别转染诱导培养后第6天的小鼠MSC,48 h后用RT-PCR技术检测细胞内myocardin在mRNA水平的表达;同时用免疫组织化学方法 检测平滑肌肌球蛋白重链(sM myosin heavy chain,SM-MHC)的表达来鉴定平滑肌样细胞的分化.结果 成功构建myocardin特异性siRNA真核表达载体,利用其沉默myocardin基因后,干扰组相比空白对照组myocardin mRNA表达下调42.86%,差异有统计学意义(P

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