四环素调控表达的反义bcl-2对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC生长和凋亡的作用
摘要
目的研究由四环素调控的反义bcl-2 的表达对人神经母细胞瘤细胞系SK -N -MC细胞的生长和凋亡的作用并初步探讨其相关机制.方法非定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的由四环素调控表达的真核细胞表达载体PUCCOMB1CMV/ Asbcl-2;应用脂质体Lip ofectamineTM介导转染SK-N-MC细胞,同时以空载体转染细胞作为对照.MTT法研究细胞的生长和增殖状况,提取DNA 梯带和应用流式细胞术检测凋亡细胞.逆转录-聚合酶链反应(RT - PCR)研究细胞凋亡中bcl-xL/ bcl-xS基因在mRNA水平上表达的变化.Western杂交检测bcl- 2及其上下游相关基因caspase-3、PARP的变化.结果转染反义bc l-2的细胞生长增殖缓慢 , 在去血清培养的相同的时间内其凋亡细胞数也明显多于对照组细胞,提前出现 DNA梯带. 在细胞的凋亡过程中检测到非活性caspase-3酶原蛋白减少并检测到bcl-2、PARP蛋白的降解产物条带.但bcl-xL/bcl-xS基因在mRNA水平上表达无明显改变.结论反义bcl-2 mRNA可抑制SK-N-MC细胞的生长和增殖,促进去血清培养所诱导的SK-N-MC细胞的凋亡.在细胞凋亡过程中caspase-3被激活,bcl-2和PARP蛋白被裂解,但bcl-xL/bcl-xS在反义bcl -2 mRNA诱导的SK-N-MC细胞的凋亡过程中无变化.
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