基于荧光定量PCR技术的人类CYP2C9和VKORC1基因多态性检测方法学评价
摘要
目的:对基于荧光定量PCR技术的人类CYP2C9和VKORC1基因多态性检测试剂盒进行性能评价.方法:选取20例已通过Sanger测序确定基因分型的临床样本编盲,按照试剂盒流程进行实时荧光PCR检测,评价其准确度;对4种基因型样本(CYP2C9*3纯合野生型、CYP2C9*3杂合突变型、VKORC1-1639G＞A纯合突变型和VKORC1-1639G＞A杂合突变型)重复检测10次,评价其批内精密度;DNA样本梯度稀释,评价最低检测限.结果:实时荧光PCR法与测序结果对比分析,结果全部一致,准确度100％.不同基因型批内精密度均≤5％,批内精密度可接受.DNA浓度在0.964 μg/μL仍可检测标本的基因型.结论:实时荧光PCR技术对人类CYP2C9和VKORC1基因分型检测在方法学上稳定可靠,此评价模式可适用于基于荧光PCR技术的其他基因多态性试剂盒的评价.
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