应用Gibson Assembly法快速构建人组蛋白甲基化转移酶启动子荧光素酶报告载体

朱进(苏州大学附属第二医院泌尿外科,江苏苏州,215004);单玉喜(苏州大学附属第二医院泌尿外科,江苏苏州,215004);阳东荣(苏州大学附属第二医院泌尿外科,江苏苏州,215004);

阅读：1196 临床与病理杂志； 2016年第36卷第12期

摘要

目的：快速构建人组蛋白甲基转移酶(enhancer of zeste homolog 2，EZH2)启动子荧光素酶报告载体并验证其活性。方法：因EZH2启动子富含GC，故应用Gibson Assembly方法设计分两段扩增，然后将片段一步法连入pGL3-Basic质粒，构建荧光素酶报告载体，进行酶切鉴定。与pRL-TK内参照质粒共转染C4-2细胞，双荧光素酶分析法检测启动子的活性。结果：经酶切鉴定证实成功构建了EZH2启动子报告载体，双荧光索酶报告基因检测结果显示构建的报告载体具有启动子活性。结论：快速成功构建了具有启动子活性的EZH2启动子荧光素酶报告载体，为进一步研究前列腺癌中EZH2表达调控机制提供必要的实验材料。

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