RNAi技术抑制HCMV-IE1表达的在体实验研究

谢妮(深圳大学附属第一医院,深圳市第二人民医院医学实验中心,深圳,518035);袁建辉(深圳市疾病预防控制中心,深圳,518020);韩艳萍(深圳大学附属第一医院,深圳市第二人民医院医学实验中心,深圳,518035);吴瑾滨(深圳大学附属第一医院,深圳市第二人民医院医学实验中心,深圳,518035);

阅读：246 临床与病理杂志； 2010年30卷6

摘要

目的:研究RNA干扰(RNA interference,RNAi) 对体内人类巨细胞病毒-立即早期基因1(human cytomegalovirus immediate-early gene 1,HCMV-IE1)表达的沉默作用,为靶向HCMV-IE1的基因治疗提供科学的实验依据.方法:选取60只雄性昆明种小鼠,并分为3组,分别为实验对照组(注射生理盐水)、病毒感染组(注射HCMVAD169株病毒液)和RNA干扰组(染毒后第2天注射转染了表达RNAi载体的人胚肺成纤维细胞液);采用PCR法检测小鼠体内HCMV基因的表达水平;采用ELISA检测动物血清中HCMV-IgM的含量;采用免疫组织化学和Western免疫印迹技术分别测定小鼠体内HCMV-IE1的蛋白水平.结果:PCR结果表明干扰组比病毒感染组的HCMV的基因表达下调20%;ELISA结果表明RNAi能使动物血清中HCMV的含量降低为19%;免疫组织化学和Western免疫印迹结果证实,干扰组和病毒感染组的HCMV-IE1蛋白水平分别降低为17.6%和18.5%.结论:RNAi技术能有效地抑制目的基因在体内的表达,有可能用于靶向HCMV-IE的基因治疗.

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