LDTI抑制肥大细胞类胰蛋白酶活性并阻断其抑制胆固醇流出能力的研究

赵战芝(南华大学心血管病研究所南华大学机能学实验中心,湖南,衡阳,421001);杨永宗(南华大学心血管病研究所);王佐(南华大学心血管病研究所);危当恒(南华大学心血管病研究所);史文元(南华大学心血管病研究所);

阅读：262 临床与病理杂志； 2005年25卷6

摘要

目的:肥大细胞(MCs)类胰蛋白酶是一种丝氨酸蛋白酶,目前未发现其体内内生的抑制剂.本研究用水蛭源性类胰蛋白酶抑制剂(LDTI)研究MCs颗粒释放液抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的机制.方法:用Compound 48/80刺激大鼠腹腔MCs活化,制备颗粒释放液.荧光分光光度仪检测MCs组胺释放率.采用丙酮抽提LDTI并用反相高效液相纯化.酶法检测MCs颗粒释放液中类胰蛋白酶的活性.用15%非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳检测HDL3的改变.用高效液相色谱检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)和胆固醇酯(CE)含量,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出.结果:MCs颗粒释放液使泡沫细胞内胆固醇流出减少,总、游离胆固醇蓄积增加,HDL3的载脂蛋白A-I降解;而用LDTI抑制MCs颗粒释放液中类胰蛋白酶的活性后,可取消MCs颗粒释放液的这些作用.结论:LDTI能抑制MCs颗粒释放液的作用,表明类胰蛋白酶可以抑制胆固醇外流,而且与HDL3的apoA-I的降解有关.

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