BRCA2基因启动子的克隆和分析

刘璐(苏州大学附属第一医院病理科,苏州,215006);徐晓婷(苏州大学附属第一医院放疗科,苏州,215006);秦磊(苏州大学附属第一医院外科,苏州,215006);金晓红(苏州大学附属第一医院麻醉科,苏州,215006);顾冬梅(苏州大学附属第一医院病理科,苏州,215006);王修珍(苏州大学附属第一医院病理科,苏州,215006);刘蔚(苏州大学附属第一医院病理科,苏州,215006);

阅读：329 临床与实验病理学杂志； 2013年29卷2

摘要

目的构建BRCA2基因启动子的荧光素酶报告质粒,为BRCA2基因调控研究提供基础.方法采用高保真Taq聚合酶,从正常人外周血中扩增出BRCA2启动子并将其插入质粒中.通过基于PCR的定点突变方法在多态性位点rs3092989(-254A/G)获得含-254G等位基因的序列.亚克隆BRCA2启动子片段至pGL3-basic报告基因载体中,构建含BRCA2启动子的重组报告质粒.转染HeLa细胞,评价启动子活性以及-254A/G多态性位点对活性的影响.结果酶切和直接测序法证实所构建质粒含有pGL3-basic及BRCA2基因启动子序列,扩增的含-254A和-254G的BRCA2启动子序列正确.构建的报告基因具有启动子活性,与pGL3-basic质粒相比较,BRCA2启动子的相对荧光单位增加了413倍.rs3092989(-254A/G)多态位点未明显影响启动子活性.结论 BRCA2转录起始位点上游序列具有较强的启动子活性.成功克隆BRCA2启动子并引入相关突变,可为后续的基因转录调控研究奠定基础.

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