人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体构建与在人髓母细胞瘤DAOY细胞中表达

王晓玫(深圳市人民医院病理科,暨南大学第二临床医学院,深圳,518020);金红涛(深圳市人民医院病理科,暨南大学第二临床医学院,深圳,518020);成志强(深圳市人民医院病理科,暨南大学第二临床医学院,深圳,518020);彭全洲(深圳市人民医院病理科,暨南大学第二临床医学院,深圳,518020);胡锦涛(深圳市人民医院病理科,暨南大学第二临床医学院,深圳,518020);高利昆(深圳市人民医院病理科,暨南大学第二临床医学院,深圳,518020);许静(深圳市人民医院病理科,暨南大学第二临床医学院,深

阅读：297 临床与实验病理学杂志； 2012年28卷12

摘要

目的构建人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体,并检测其在人髓母细胞瘤DAOY细胞中的表达.方法从人髓母细胞瘤DAOY细胞中提取总RNA,采用RT-PCR法对编码PRDX3的基因片段进行扩增,应用基因重组技术,将目的片段亚克隆到pEGFP-C2真核表达载体,经PCR、酶切和测序鉴定后,用脂质体法将重组质粒转染入DAOY细胞,分别采用RT-PCR法、Western blot法检测PRDX3在DAOY细胞中的表达.结果双酶切及测序结果验证PRDX3片段正确插入pEGFP-C2质粒,转染后的PRDX3基因mRNA及蛋白质水平均明显上调.结论成功构建了具有报告基因-增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达载体pEGFP-C2-PRDX3,为进一步研究PRDX3基因在人髓母细胞瘤中的生物学功能奠定了基础.

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