shRNA干扰Jurkat细胞株MDM2表达对细胞生物特性的影响

朱有凯(中山大学中山医学院基础医学院病理学教研室,广州,510080);林汉良(中山大学中山医学院基础医学院病理学教研室,广州,510080);顾霞(中山大学中山医学院基础医学院病理学教研室,广州,510080);张萌(中山大学中山医学院基础医学院病理学教研室,广州,510080);吴红阳(中山大学中山医学院基础医学院病理学教研室,广州,510080);许湘(中山大学中山医学院基础医学院病理学教研室,广州,510080);

阅读：310 临床与实验病理学杂志； 2005年21卷3

摘要

目的研究MDM2基因与白血病细胞生物学特性的关系.方法应用pSilencer 4.1-CMV neo构建MDM2-shRNA表达载体pMDM2-shRNA,采用脂质体将载体导入Jurkat细胞,利用G418筛选出稳定表达shRNA细胞后,行RT-PCR和Western blot等技术检测细胞MDM2表达水平、基础生长曲线、细胞周期变化以及UV照射后细胞生长变化.结果发现转染pMDM2shRNA的细胞MDM2 mRNA及蛋白质的表达均下降＞50%,细胞的生长减慢,出现一定程度的G1～S期阻滞,DNA损伤后细胞恢复较慢.结论MDM2基因表达下降后,可导致细胞增殖减慢以及降低损伤修复的能力;细胞内表达shRNA可长期敲低靶基因的表达,可作为较理想的基因功能研究细胞模型.

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