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STK 15基因沉默导致胃癌细胞分裂停滞

兰斌(福建医科大学附属第一医院肿瘤外科,350005);陈雪华(200025,上海第二医科大学附属瑞金医院外科,上海消化外科研究所);刘炳亚(200025,上海第二医科大学附属瑞金医院外科,上海消化外科研究所);瞿颖(200025,上海第二医科大学附属瑞金医院外科,上海消化外科研究所);张晓青(200025,上海第二医科大学附属瑞金医院外科,上海消化外科研究所);蔡劬(200025,上海第二医科大学附属瑞金医院外科,上海消化外科研究所);戴起宝(福建医科大学附属第一医院肿瘤外科);张健(福建医科大学附属协

摘要

目的探讨丝氨酸/苏氨酸激酶15 (serine/threonine kinase15, STK15) 基因在胃癌细胞有丝分裂中的作用.方法应用RNA干扰技术(RNAi)抑制胃癌细胞株MKN45细胞STK15基因表达;real-time定量PCR及Western blot检测干扰前后STK15 mRNA及蛋白质表达的变化;倒置显微镜观察MKN45细胞形态的变化;流式细胞仪检测细胞周期的变化;MTT法检测细胞增殖速度的变化;免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察MKN45细胞微管及有丝分裂表型的改变.结果 STK15基因沉默后,其 mRNA及蛋白质表达明显下降,real-time PCR结果显示,转染后48 h, STK15-组STK15 mRNA 水平较对照siRNA组的下降了89.54%;Western blot灰度比半定量检测显示,STK15蛋白水平较对照siRNA组降低了57.18%.较多MKN45细胞呈圆形改变并呈现G2期细胞的DNA含量, STK15-组3个时间点的圆形细胞占18.95%,而对照siRNA组为8.34%,差异有统计学意义 (P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,STK15-组G2期DNA含量细胞平均值为26.13%,而对照siRNA组G2期DNA含量细胞平均值12.46%(P<0.05).细胞增殖速度减慢(P<0.05).细胞有丝分裂表型发生改变(P<0.05).结论 STK15基因在MKN45细胞有丝分裂过程中可能起着关键作用,阻断其表达可导致MKN45细胞有丝分裂停滞.

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