转染胸苷磷酸化酶基因对胃癌细胞株氟尿嘧啶类药敏感性的影响
摘要
目的 观察胃癌细胞株中胸苷磷酸化酶(TP)表达水平与其对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)及其前体药去氧氟尿苷和卡倍他滨敏感性的关系.方法 利用Lipdectamin 2000将质粒pEGFP-N1及重组质粒pEGFP-N1-TP转染入胃癌细胞株AGS中,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况并用G418筛选阳性细胞克隆AGS-P和AGS-pTP.免疫细胞化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌细胞株中TP蛋白及TP mRNA的表达情况,四甲基偶氮唑蓝(MTY)比色法检测上述三种胃癌细胞株对氟尿嘧啶类药物的敏感性.结果 构建了稳定表达TP和绿色荧光融合蛋白的胃癌细胞株AGS-pTP及稳定表达绿色荧光蛋白的胃癌细胞株AGS-p;免疫细胞化学显示AGS、AGS-P不表达TP蛋白,而AGS-pTP则强表达;RT-PCR检测显示AGS-pTP中TP mRNA表达水平(灰度比值,0.8090±0.0450)明显高于AGS(0.0490±0.0046)及AGS-P(0.0610±0.0069;P＜0.01).AGS-pTP对去氧氟尿苷和卡倍他滨的敏感性明显增加,AGS-pTP对去氧氟尿苷和卡倍他滨的IC50值分别是AGS-P的1.7和2.2倍.相比AGS-P,AGS-pTP对5-FU的敏感性无明显改变.结论 提高胃癌细胞中TP表达水平能增强胃癌细胞对5-FU前体药卡倍他滨和去氧氟尿苷的敏感性,但并不影响胃癌细胞对5-FU的敏感性.
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